史上最全试剂配制知识

想成功做一个实验，要涉及许多方面。而试剂的配制则是最基础却又让人头疼的问题。试剂配制失败或保存不当，浪费钱财不说还可能威胁生命安全。下面，我们就来介绍最贴心、最具实用的试剂配制有关知识，帮助大家顺利实验。

按照其贮存状态来分： 

试剂有已配好的即用型试剂和需要配制的试剂。
前者，如：一些性质较稳定的、或单剂量包装的试剂。像Western中的DAB显色试剂就有现成的可直接用。后者，如：大多数的药物、试剂。当然，要配制的占大部分。

按其用途来分，可分为：
药物：通常就是我们要考察其药效或机制的化合物或中草药提取物。又可分为原料药和制剂。原料药一般可直接应用。制剂有的要进行提取，有的可直接用。

动物模型用试剂：如造糖尿病的STZ、造肝损伤的氨基半乳糖胺、四氯化碳、造损伤的镉剂、造成肺损伤的博来霉素、造成肾损伤的腺嘌呤、造成炎症的角叉菜胶等等。

动物模型用饲料：这个一般是固体状态。也有半固体的。液体状态的较少。如：高脂饲料中要配以胆固醇、丙基硫氧嘧啶、胆酸盐、鸡蛋黄、猪油等。
动物基本操作用试剂：如：麻醉用试剂、动物除毛的试剂硫化钠、动物标记的试剂苦味酸、取血或插管用的试剂肝素、消毒用的75％乙醇、碘伏、新洁尔灭、动物手术后护理的抗生素等。
各类缓冲液或基础分散介质：如：PBS、生理盐水、柠檬酸缓冲液、克氏液、任氏液、配难溶性药物用的0。5％CMC－Na液、DMSO液、增溶剂泊洛沙姆（与药物混匀后再加入溶剂中）
保存标本的试剂：如：10％福尔马林、中性福尔马林、4％多聚甲醛、Bouin's液等。
清洗液：如：稀盐酸液、重铬酸钾洗液。

按其使用时限来分：
即配即用型：如：STZ极易分解，配制后要迅速全部用完，不然完全失效。一些酶类的试剂，配制后也要尽快用完。已配好的显色剂，通常也是较短时间内用完。对水不稳定的药物，如：青霉素。尽快用完。
可在一周内使用短效型：主要是一些亚稳定状态的溶液。可随温度、氧气的作用而逐渐分解而达不到使用的要求。如：蛋白电泳中的过硫酸铵，是一种促进氧自由基产生的辅助试剂，促进凝胶的形成，时间久了就不能产生自由基，故而一般在一周内使用，最多两周。有些缓冲液，尤其是做离体实验的，一般低温保存下尽快地用完。不然可影响实验结果。
一个月以内的中效型：许多试剂在配好后，如果能低温保存，能用一个月以上。
三个月以上的长效型：不少性质稳定，且对浓度准确度要求不是太高的溶液，可长期保存使用。像福尔马林、生理盐水、CMC－Na溶液。

按其纯度可分为：

化学纯:一般化学实验用的,含少量杂质.纯度一般应在98%以上.
分析纯:做分析实验用的,含微量杂质,纯度一般应在99%以上.缩写: A.R
色谱纯:液相流动相的要求.
生化纯:好像在一些生化试剂里有这么写的.缩写:B.R
要注意的是,有些厂家有标明 优级纯(G.R)的, 实际上,可认为相当于分析纯的级别.

还有就是级别最高的:标准品、对照品。其实这二者差别不大。我们通常混用这两个词。按药典规定，我们通常用的基准物质称为对照品。而抗生素类（注意，不是合成抗菌药）的基准物质则称为标准品。而事实上，我们似乎总是把“标准品”当作最高级别，而把‘对照品’当作一个比“标准品”低一点的级别。事实并非如此，这两个词应是一样的。只是标准品特指抗生素或其它生物制品。其中， 标准品特指用于生物检定、抗生素或生化试剂中含量或效价检定的基准物质，按效价单位计，与国际标准品标定。动物实验中，用到分析纯及以上级别的比较多。做药动学实验，液相检测时要注意，要用色谱纯试剂，不然严重影响实验结果。

按其毒性分：

有无毒、低毒、中等毒性、剧毒几种

这是对大多数固体试剂而言。如果是液体试剂，则就要看它能否有溶剂中混匀或者分散。一般而言，我们可以把试剂分为易溶性和难溶性的两大类。又可分为脂溶性的亲水性两大类。下面我们就来谈谈如何配制这些试剂。

易溶性的：像绝大多数的酸、碱、盐类试剂，都是易溶性，且一般是水溶性的。这类试剂很多是用双蒸水配制的。

难溶性的：难溶性的有的是脂溶性比较高的，可以用油来配制。但有时候不能用油，但又要混匀，这时我们只好加助悬剂或者增溶剂，或者用潜溶剂。助悬剂，如：羧甲基纤维素钠（CMC－Na）；增溶剂，如：泊洛沙姆188；潜溶剂，如：乙醇。也有少数用DMSO来配的。DMSO号称万能溶剂。但实际使用时，要考虑可能引起一些药理效应，从而对实验结果产生干扰。能不用尽量不用。

在配制难溶性物质的时候，有的可以加加热，有的可以搅拌，有的可以用超声。要特别注意不要盲目加热。一是有些物质一加热就变质了，产生了分解产物；二是有些物质加热就失效了，如一些酶或蛋白质类的物质。

有些物质的溶解性是我们所熟知的。配这类物质的时候自然就轻车熟路了。但是，有些试剂我们并不知道。该如何弄呢？方法有三。一是查看试剂包装的说明。一般上面会有一些信息。二是上网查询。google上找到的网页或是论文都可以。三是要试。可以用小剂量的做预试，看看溶解度如何。值得注意的是，乙醇是一种非常好的溶剂。通常与水以不同浓度混合，有时可达到比较满意的效果。

一是配制试剂的容器的选择。通常我们会选择身边一切可利用的容器。用得比较多的是玻璃瓶。极少量的试剂可以用子弹头型的Doff管来装。小的有青霉素瓶，又称西林瓶。大一点的有输液瓶，有100ml,250ml,500ml的不等。有时也可用一些高分子材料的瓶子装试剂，这样的瓶子一般我们是用来装些有毒的试剂。因为用完了就可以丢弃。平时不妨收集各种小瓶子，很多时候能派上用场。

二是标签。贴标签是个必不可少的工作。有人喜欢用记号笔写上标签。要注意有油性笔和水性笔两种，前者写出字较牢固，不易洗掉；而后者通常一沾水就踪迹全无。所以注意要用油性笔写。但此法有个缺点，就是下次用此瓶配其它试剂时，字迹不易洗掉，有些麻烦。也可以在纸上写好，然后贴上透明胶。也可以在医用胶布上写上字，贴上去。不过这种方式有时亦可被水弄得字迹不清。这几种方法可酌情选择。
要特别指出的是，标签上一定要写上日期！这样，可以让自己能知道试剂配了多大时间，如果出现问题，有一个证据。也可以让别人知道其大致是否在有效期内。

三是浓度的准确性。浓度要准确，要注意几点。一是正确选择量器。像配对照品溶液，一般是用容量瓶，而且要选合适的规格。配一般的试剂，用量筒，切记不要用量杯。量杯是很粗略的量器。配体积小的溶液，通常要用移液枪，或微量进样器。二是有些量特别小的试剂（通常是5mg以下），可以直接在其贮存容器里加溶剂。如：PCR、蛋白电泳中某些试剂就是极微量的装在Doff管中，甚至基本看不见。有些在配之前还要高速离心，便极微量的粉末沉积于管底。不然，一打开盖，试剂粉末就损失掉了。三是要注意配好的试剂要冷却到室温最终量取体积才是准确的。如：有些试剂在配制过程中要加热至沸腾，溶剂损失不少，要待其冷却至室温再加溶剂补足。

四是有关特殊要求。有的试剂配制前要加温。如：冰醋酸在温度16度以下，是结成冻块了，要缓缓加温后使用。DMSO也会出现类似现象。有的试剂配好后要求遮光，可选择黑纸或者黑塑料来包裹。有的试剂不是用水来配，而是要别的溶剂。如：PMSF，要用异丙醇来配制。而且是用时再加入水中。因其在水中会较快失效。有的试剂是要求配好后再过滤的。如有失误，宜反复过滤直到符合要求。有的试剂是极易氧化的，通常要加抗氧剂。如：6-羟基多巴胺（6-OHDA）,通常是用0.2%维生素C水溶液来配。

配好的试剂，在保存的过程中，或多或少会出现一些问题。有的稍加处理即可，不影响使用；有的则不能继续使用，甚至产生毒性。因此，了解试剂常见的一些可能变质的现象，有助于我们掌握一般规律，并能顺利解决实验中出现的问题。

A 物理性质的变化
最常见的有：产生沉淀或结晶、产生絮状物、颜色变化、黏度变化、产生霉菌、产生气味。
产生沉淀或结晶：最常见的是一些缓冲液，当温度比较低的时候，可能有些物质是饱和溶液，低温可使其析出。当恢复至室温时，即溶解。比如，配含氯化锌的多种离子的溶液，打开冰箱发现有沉淀，置室温下摇匀后，已澄清，不影响使用。考马斯亮蓝如配制不当，即有可能出现蓝色沉淀。一般来说，酌情调整其的中乙醇浓度可以避免。
产生絮状物：有些物质在低温下析出成絮状，一般不影响使用。但要仔细观察，如絮状物是其它物质，或者是菌丝，则不可用。对于含水用含糖的溶液尤其要注意。
颜色变化：这一变化可能是在配制过程中加温后，过一段时间出现的；也有可能是贮存过程中受光照所引起的；也有可能是溶液中各物质相互作用所引起的。一般是颜色变深。。
黏度变化：主要是一些高分子物质的“溶液”。其实高分子是分散在其中，不是真正的溶解。如：明胶溶液，配制时间过长，有的就会变稀，这可能是明胶的质量问题。
产生霉菌：常见于含水的，含糖分较高的一些溶液。主要是保存不当所致。一般而言，配制过程中注意操作，配好后置冷藏，短时间内是不会出现霉菌的。
产生气味：这主要是可能溶液中的物质相互反应产生了一些气体，或者本身溶解其的中气体跑了出来，也有的是本身固有的气味变化。如：产生氨气气味、失去醋酸气味等等。

B 化学性质的变化
如：PH的变化、失去氧化性、失去还原性
PH的变化：当怀疑试剂出现问题的时候，我们可以测一下其PH。如不在正常范围内，即可认为已变质。
失去氧化性：有一次用浓硫酸做蒽酮-硫酸法测多糖的含量，发现配好的试剂没有反应，没出现应有的颜色。于是把浓硫酸取一滴滴于报纸上，发现根本没有像往常一样将报纸碳化。固此硫酸已不可用。这可以说是用通过简单的观察来判断试剂有无变质。同样，像双氧水等一些强氧化剂可通过类似的检测来判断。
失去还原性：像维生素C 等还原性物质，当变质时一般有颜色变化。

C 生物学性质的变化
如：酶失活、生物分子降解等
这种变化并不是一下就可以看出来的。往往是做实验中，或者是实验做完后结果不如意时，才会考虑可能是试剂出了问题。

如何解决试剂保存中出现的问题呢？
一般而言，除少数不影响使用的现象外，试剂都得重配。

首先，我们来了解一下毒性的基本常识。
按其作用时间长短，可分为：

急性毒性和长期毒性
按其作用的分布，可分为：

局部毒性和全身毒性
按其作用部位及机制，可分为：
脏器毒性：如：氯仿有肝毒性；SDS粉末可沉积于肺
血液毒性：如：苯有血液毒性
神经毒性：如：丙烯酰胺有神经毒
致癌：如：溴乙锭可致癌，乌拉坦可致癌。
其它毒性：如：过敏、皮肤刺激等

对我们而言，了解其毒性机制是很重要的。这样，我们就知道如何防护，也知道在万一沾上有毒试剂时该如何处理。

对于局部毒性和一些脏器的慢性毒性，我们往往是不会特别地担心。但对于导致血液、神经系统的毒性，以及致癌的毒性，却是我们感到最恐怖的。事实上，只要我们做到了安全防护，基本上也没有多大问题。即使对于一些致癌物，我们也应该胆大心细地使用。我们的身体也不是那么脆弱的，还有免疫系统在起作用。
做好必要的防护工作是最重要的。

下面我们来具体谈一谈如何在配制毒性试剂过程中防护自己。

１、要了解试剂的毒性机理。这是防护的一个基本前提。一般标明有毒性的物质，其机理大多清楚。这样，我们对于毒性试剂心里有个底。像对于氯仿这样的溶剂，我们知道其长期应用可致脂肪肝。但平常用的时候偶尔洒一点到皮肤上，我们清洗即可，也就没有多大的担心。双氧水，浓度不高的话，万一有一点弄到皮肤上也不是很担心，只是可能会脱掉一点皮。但不至于有生命之虞。相反，如果滴上一滴致癌的试剂，那我们就会感到很恐怖了。因此，了解其毒性机理，我们就会面对试剂心中有数，不至于太不重视，也不至于过分担心。

２、要了解常用的毒性物质的性状及预防措施。针对不同毒物，我们有不同的措施。如：毒物为挥发性物质，我们可考虑戴上防毒的面具，在有通风机械的地方配制，配好后盖紧；对易扬起粉尘入肺的物质，我们戴口套，并尽可能轻拿轻放；对于易致癌及有潜在致癌物质，可戴一次性手套。

３、了解中毒的症状，不怕一万，只怕万一。我们常常不可能百分之百不接触到有毒物质。了解中毒的一些症状是很有必要的。如：有的有红肿、疼痛、眼刺激性、特异性恶臭等。接触到皮肤的话，一般情况下我们是用大量水清洗。严重的话，要去医务室或医院处理。

在了解上述知识的基础之上，我们来讲一下配制毒性试剂的注意事项。

第一，毒性试剂的容器要专用，并有醒目的标志。很多毒性试剂，我们用高分子材料的瓶子，除非一定要用玻璃瓶。因为玻璃瓶总是被人重复利用，担心有人在不知情的情况下误用装过有毒试剂的瓶子。通常标签我们用红色的，标明“有毒！”，必要时画上毒性的符号。

第二，配制毒性试剂的防护。一是一般要戴一次性手套，必要时戴口罩及防毒面具。二是，试剂不要接触到容器的外壁。因为试剂沾到外壁上以后，每次拿取都要戴一次性手套。这样，有可能不小心用沾了有毒试剂的一次性手套接触了其它瓶子，扩大了污染的范围。我们的做法通常是，如果外壁有沾染，立即更换一个瓶子。这样，就可以直接用手拿瓶壁外，而不担心。拧开盖子时，盖子一般宜朝上放置，这样也可减少污染范围。三是配制完毕，污染物及时投放到指定地点。包括沾有毒性试剂的瓶子，手套，及其它一次性使用器具等。四是长期接触有毒试剂的器具要放在专用的范围内。如：做PCR的电泳槽，长期接触到电泳液，EB等，须固定在一个范围内，不要到处乱放。这样就能尽可能地减少污染。

第三，配制毒性试剂要按程序来配，注意与其它试剂反应产生致癌物的试剂。如：PCR中常用到的试剂焦碳酸二乙酯（DEPC），可与氨反应而产生致癌物。但通常我们在用其浸泡Tip头后，使其挥发掉。DEPC能与胺和巯基反应,因而含Tris和DTT的试剂不能用DEPC处理。这里，实际上所说的，是一些潜在致癌物。要注意在使用过程中的配伍禁忌。

参考来源：丁香园